ФРАГМЕНТАЦИЯ ДНК СПЕРМАТОЗОИДОВ АРТ-ЭКО – клиника лечения бесплодия в Москве

Фрагментация ДНК сперматозоидов (TUNEL-тест)

Климов Юрий Викторович

Под фрагментацией ДНК сперматозоидов следует понимать нарушение целостности их цепочек. Чем сильнее повреждения, тем хуже качество генетического материала, следовательно, низкая вероятность наступления оплодотворения.

Если повреждения несущественны, яйцеклетка в состоянии устранить их самостоятельно. Это зависит от характера фрагментации, количества поврежденных участков, качества самой яйцеклетки (обычно ее определяет возраст и состояние репродуктивного здоровья женщины).

Причины

Причины нарушения ДНК бывают двух типов: внешние и внутренние. Внутренние это:

  • Сбой механизма отбраковки. У здоровых мужчин непригодные к оплодотворению сперматозоиды, вырабатываемые семенниками (тестикулами), устраняются. Но если функционирование механизма нарушено, они попадают в сперму, снижая ее качество и способность к зачатию.
  • Нарушение процесса вызревания. Созревают сперматозоиды в придатках яичек, в ходе вызревания происходит конденсация хроматина ядра клеток, отвечающая за активность сперматозоидов. Если процесс протекает с отклонениями, это становится причиной фрагментации их ДНК.
  • Прохождение лечения химио- и рентгенотерапией.
  • Повышенная температура тела.
  • Варикоз сосудов семенного канатика.
  • Высокотемпературные воздействия.
  • Наличие хронических заболеваний, воспалений, инфекций.
  • Оксидативный стресс при переходе через эпидидимий. Повреждения вызывают свободные радикалы, либо сперматозоиды выходят невызревшими.

Также нарушение цепочки ДНК вызывают токсины, прием антибиотиков, заболевания мочеполовой системы, вредные привычки.

Показания к анализу

Чтобы выявить разрыв ДНК-цепочки сперматозоидов, проводится специальный тест. Спермограмма в данном случае неинформативна. Она показывает только концентрацию сперматозоидов в эякуляте, их активность. Тест на фрагментацию показан:

  • при мужском бесплодии, если отсутствуют другие провоцирующие его факторы;
  • если попытки искусственного оплодотворения не дали результата;
  • повторяющиеся выкидыши;
  • если эмбрион плохого качества;
  • мужчинам в возрасте от 45 лет;
  • после криохранения образца спермы перед ЭКО (экстракорпоральным оплодотворением);
  • при варикозе сосудов семенного канатика;
  • если в течение трех месяцев имела место повышенная температура тела.

Также процедуру должны пройти мужчины, работающие в условиях повышенной вредности.

Как проводится анализ

Для проверки целостности ДНК спермы проводится tunel-тест, предполагающий микроскопическое исследование сперматозоидов. Образец спермы пациент должен собрать в специальный стерильный контейнер с крышкой. Важно! Презерватив не подходит для этой цели, так как компоненты, входящие в его состав, могут оказать негативное влияние на подвижность сперматозоидов. Также при транспортировке емкости с генетическим материалом необходимо соблюдать температурный режим, составляющий диапазон температур в пределах +27 до +37 градусов Цельсия.

Чтобы получить точный результат, анализ должен быть проведен в течение часа с момента забора образца. Для этого лаборант добавляет в эякулят реактив. Он, вступая в реакцию с семенной жидкостью, заполняет разрывы ДНК флуоресцирующим нуклеотидом, делая видимыми фрагментированные сперматозоиды. Лаборант проводит их подсчет, который указывается в процентах.

Для получения полной картины параллельно проводится электронно-микроскопическое исследование и спермограмма.

Подготовка к TUNEL-тесту

Чтобы тест был максимально точным, перед сдачей образца необходимо в течение 2-7 дней: воздержаться от половых контактов, приема лекарственных препаратов, посещения бань. Важно соблюдать режим питания, избегать употребления алкоголя, не курить. Перед забором спермы нужно освободить мочевик.

При повторных проведениях анализа рекомендуется соблюдать последовательность и длительность подготовительных мероприятий, так как это может повлиять на результат.

Расшифровка

После анализа выдается результат с индексом теста и снимок, на котором зафиксированы фрагментированные сперматозоиды. Индекс – это соотношение между поврежденным и здоровым, способным к оплодотворению, генетическим материалом. В норме показатель не должен быть выше 15%. Это говорит о том, что спермиев с разрушенной цепочкой ДНК меньше, чем здоровых, поэтому репродуктивное здоровье мужчины в порядке и существует высокая вероятность естественного зачатия.

Читайте также:  Клотримазол крем 1% 20г купить в Москве по цене от 67 рублей

При индексе выше 15%, но ниже 30% сохраняется возможность оплодотворения яйцеклетки естественным способом, но для этого может потребоваться много времени.

Если количество поврежденных сперматозоидов в эякуляте составляет 30-50%, специалисты считают, что наступление беременности естественным путем маловероятно, поэтому рекомендуют ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение), внутриматочную инсеминацию (репродуктивная методика, предполагающая введение здоровых, полученных и отобранных заранее сперматозоидов в цервикальный канал) или ИКСИ. Так, при показателе индекса более 30%, врачи-репродуктологи рекомендуют проводить ЭКО. Если фрагментированный генетический материал составляет 50% и выше, экстракорпоральное оплодотворение малоэффективно. Целесообразно применять интрацитоплазматическую инъекцию сперматозоидов (ИКСИ). При индексе 60% и больше, шансы на успешное оплодотворение минимальны. Проводится ИКСИ, либо берется донорская сперма.

Лечение

Еще недавно отсутствовала возможность выявить поврежденные сперматозоиды, не говоря о том, чтобы это лечить. Сегодня эта проблема поддается лечению. Внедрение инновационных медицинских методик позволяет успешно восстанавливать фрагментированную ДНК сперматозоидов.

Для этого следует устранить или ограничить воздействие факторов, провоцирующих мужское бесплодие: лишний вес, вредные привычки (курение, алкоголь), воздействие токсических, химических веществ (работа на вредных производствах). Второй этап – комплексная диагностика, устранение различных воспалительных процессов в организме, в том числе заболеваний репродуктивной системы мужчины. Параллельно проводится лечение антибактериальными, противовоспалительными медпрепаратами (при необходимости). Обязательно назначаются витаминные комплексы, антиоксиданты, позволяющие восстановить мужское здоровье и способствующие формированию здоровых сперматозоидов.

Длительность лечения может составлять 3-6 месяцев. Иногда может понадобиться больше. Если терапия оказалась малоэффективной, и количество здоровых сперматозоидов не превышает 20-30%, врачи предлагают паре услугу ИКСИ. Так, из эякулята репродуктологи искусственным путем отбирают здоровый, способный к оплодотворению, генетический материал. Затем его подсаживают в яйцеклетку женщины.

В случае большого количества спермиев с фрагментированным ДНК, также проводиться операция по извлечению их непосредственно из яичек. Это обусловлено тем фактом, что во время эякуляции повышается процент поврежденных клеток.

Ответы на популярные вопросы

Влияет ли прием лекарств на анализ на фрагментацию ДНК?
На фрагментацию ДНК влияет прием некоторых лекарственных средств и химиопрепаратов.

Как улучшить фрагментацию ДНК?
Сначала необходимо разобраться в возможных причинах фрагментации и затем убрать ее причину, если это возможно.

Определение степени фрагментации ДНК сперматозоидов (Tunel, SCSA)

Фрагментация ДНК сперматозоидов, как один из факторов нарушения мужской фертильности, открыт не так давно — около 10 лет назад, и патофизиологические механизмы процесса фрагментации ДНК продолжают изучаться. Однако установлено, что показатель фрагментации ДНК сперматозоидов имеет определенное диагностическое и прогностическое значение в супружеских парах с нарушением репродукции.

Фрагментация ДНК сперматозоидов – это наличие одно- и двухцепочечных разрывов молекулы ДНК, нарушение целостности генетического материала сперматозоида. Именно в этой молекуле закодирована и хранится вся генетическая информация, которая при зачатии передается ребенку. И чем больше в молекуле ДНК таких разрывов, тем меньше вероятность оплодотворения яйцеклетки сперматозоидом.

Причинами фрагментации ДНК могут явиться отклонения при образовании и созревании сперматозоидов, апоптоз (естественный процесс гибели, в результате которого сперматозоид распадается на отдельные части), воздействие вредных внешних факторов. Именно такое явление, как апоптоз объясняет, почему в сперме всегда есть сперматозоиды с разрывами ДНК.

Читайте также:  Цинка Сульфат-ДИА глазные капли инструкция по применению, цена, отзывы и аналоги

У здоровых фертильных мужчин доля сперматозоидов с нарушенной целостностью ДНК составляет примерно 15%. У бесплодных мужчин доля сперматозоидов с фрагментированной ДНК может доходить до 30 %, а в отдельных случаях может подниматься и выше. На показателях спермограммы это обычно не сказывается, однако ряд исследований последних лет обосновывают наличие корреляции между концентрацией сперматозоидов в эякуляте и частотой разрывов ДНК сперматозоида.

Как фрагментация ДНК сперматозоидов влияет на фертильность?

  1. Снижается вероятность зачатия.
  2. Поврежденный сперматозоид может оплодотворить яйцеклетку, но в большинстве таких случаев уже на ранних стадиях эмбриогенеза могут начаться нарушения, и произойдет самопроизвольное прерывание беременности. Высоким уровнем фрагментированных сперматозоидов довольно часто обусловлено привычное невынашивание беременности.
  3. Проблемы могут возникнуть во время ЭКО или ИКСИ. Если будет использован сперматозоид с фрагментированной ДНК, то эмбрион может развиваться неправильно еще до его имплантации в полость матки, и попытки ВРТ с участием такого сперматозоида обречены на неудачу. Отмечено снижение и образования бластоцист, и частота наступления беременности.

Для определения степени фрагментации проводится специальный анализ — определение степени фрагментации ДНК сперматозоидов. Существует несколько методик этого анализа, обладающих практически одинаково высокой чувствительностью.

TUNEL метод. Это микроскопическое исследование спермы, цель его — обнаружить сперматозоиды с поврежденной ДНК и посчитать их количество.

SCSA — еще один метод анализа степени фрагментации ДНК сперматозоидов, основан на исследование структуры хроматина с помощью флуоресцентного ДНК-маркера. Окрашенные им сперматозоиды пропускают сквозь лазерный луч, который заставляет клетки светиться разными цветами, в зависимости от степени повреждения ДНК: зеленый – норма, желтый – умеренные дефекты, красный – критические изменения.

Правила подготовки:

  • Половое воздержание не менее 2 дней и не более недели. Оптимально – 3 суток до сбора эякулята.
  • В период подготовки не употребляйте алкоголь, не курите.
  • Избегайте перегревания (сауны, бани и т.д.) сроком в течение 72 часов.
  • Не принимайте лекарственные препараты, любые, в течение 24 часов, если врачом не указано обратное и нет угрозы жизни из-за прерывания терапии.
  • Исключите все физиопроцедуры и рентгенологическое обследование в течение 72 часов.
  • Не рекомендуется тестирование сразу же после перенесенного воспалительного заболевания с повышением температуры. Исследование лучше перенести.
  • Накануне исследования исключите физические и эмоциональные перегрузки.
  • Правильно питайтесь в период подготовки, питьевой режим -1,5-2 литра в день.

Исследование проводится при концентрации сперматозоидов не менее 1 млн/мл и объеме эякулята не менее 1 мл.

По результату теста выдается протокол, в котором указан индекс фрагментации ДНК. Индекс отражает процентное соотношение между «здоровыми» и «больными» сперматозоидами.

  • индекс фрагментации не превышает 15% от общей численности сперматозоидов — вероятность наступления беременности естественным путем достаточно высока
  • индекс фрагментации повышен и находится в пределах от 15% до 30% — шанс естественного оплодотворения возможен, но снижен
  • индекс фрагментации от 30% до 50% — возможно оплодотворение с помощью ИКСИ или ЭКО
  • индекс фрагментации ДНК сперматозоидов равен 50% и более -даже при использовании репродуктивных технологий наступление беременности маловероятно.

Задать вопрос

Вся правда об ЭКО: эмбриологи «Мать и дитя»

ЭКО с историей от «первого лица»: индекс фрагментации ДНК сперматозоидов и успех ЭКО

«Если индекс фрагментации выше 27%, не торопитесь с программой ЭКО», — показывает клинический опыт Секира Анастасии Григорьевны, генетика, эмбриолога Красноярского центра репродуктивной медицины «Мать и дитя», кандидата медицинских наук, которая также окончила аспирантуру по генетике и является автором 15 публикаций в специализированных сборниках и рецензируемых научных журналах.

Читайте также:  Бакпосев на микрофлору в гинекологии

«К настоящему времени известно, что для выявления нарушений мужской фертильности оптимальным является проведение различных исследований эякулята в комплексе. Так, например, при оценке спермограммы определяют количество и подвижность мужских половых клеток, МАР-тест позволяет выявить иммунологические нарушения у мужчины, а при оценке строгой морфологии видны нарушения строения сперматозоидов.

Кроме того, существуют и другие, относительно новые, но чрезвычайно информативные методы оценки сперматозоидов. Одним из таких методов является тест на фрагментацию ДНК, с помощью которого можно определить степень разрывов в молекуле ДНК спермиев, что часто приводит к остановке развития эмбриона на любом сроке.

Помимо этого, установлено, что в семейных парах, где у мужчин наблюдается повышенный индекс фрагментации ДНК сперматозоидов, выкидыши на ранних сроках (до 12 недель) встречаются намного чаще, чем в парах с нормальным индексом фрагментации.

Своевременное обнаружение и дальнейшая коррекция с помощью специальной терапии увеличивает шанс наступления и нормального протекания естественной беременности, а также значительно повышает вероятность получить долгожданную беременность с помощью метода ЭКО с первой попытки. В Красноярском центре репродуктивной медицины анализ оценки фрагментации ДНК сперматозоидов выполняется с 2010-го года.

Однако хотелось бы остановиться на конкретной истории, в которой благодаря комплексному подходу к оценке эякулята, включая анализ ДНК-фрагментации, удалось достичь главной цели нашей клиники – рождения в семье здорового ребенка.

В 2010-м году в Красноярский центр репродуктивной медицины обратилась молодая супружеская пара, женщине – 31 год, мужчине – 29 лет. В данной семье беременность не наступала по причине мужского фактора, а именно — было снижено количество прогрессивно-подвижных сперматозоидов в спермограмме, МАР-тест отрицательный, 4% нормальных морфологических форм (по Крюгеру), индекс фрагментации ДНК – 39%.

По результатам комплексного исследования эякулята мужчине была предложена метаболическая терапия, которую супружеская пара проходить отказалась вследствие непонимания значимости данного лечения. Ведь супруги уже приняли решение — программа ИКСИ. А дополнительное лечение, как в то время думал мужчина, — «раскрутка на деньги и потеря времени».

В результате из 11 зрелых ооцитов оплодотворение наступило только у 4 клеток. На 5 сутки развития был выполнен перенос двух эмбрионов, а у двух других эмбрионов – остановка дробления. Беременность в первом лечебном цикле не наступила.

С учетом отрицательного результата лечебного цикла, мужчине снова была предложена метаболическая и антиоксидантная терапия, которая в дальнейшем была им успешно пройдена. Удалось скорректировать число морфологически нормальных форм сперматозоидов и индекса ДНК-фрагментации практически до нормальных значений (22%).

После лечения пара обратилась для проведения повторной попытки ЭКО+ИКСИ. Во второй попытке из 22 зрелых ооцитов оплодотворение наступило у 18 клеток, на 5 сутки развития был выполнен перенос двух эмбрионов хорошего качества (эмбрионы соответствовали сроку развития, хорошие морфологические характеристики бластоцист), дополнительно были эмбрионы и для криоконсервации.

Результат лечения – одноплодная беременность, роды произошли в срок, и наши пациенты стали родителями прекрасного мальчика. Но у этой истории было продолжение – позже в этой семье родилась еще и девочка (беременность в естественном менструальном цикле!).

Если индекс фрагментации ДНК-сперматозоидов до 15% — это норма, но если 27% и выше – не стоит торопиться с ЭКО, пройдите лечение, которое позволит скорректировать этот показатель до нормальных значений.»

Ссылка на основную публикацию
Фонд AdVita Евгения Кочкина
Лимфома Ходжкина Лимфома Ходжкина (лимфогранулематоз, болезнь Ходжкина) – злокачественная опухоль лимфоидной ткани с образованием специфических полиморфно-клеточных гранулем. Опухолевый субстрат лимфомы...
Физраствор хлорида натрия для ингаляций — инструкция, дозировка для детей, взрослых и беременных
Как правильно делать ингаляцию Ингаляцией называется метод введения в организм лекарственных средств посредством вдыхания пара, жидкостных аэрозолей, газообразных веществ и...
Фиксаторы от вальгусной деформации отзывы, обзор, сравнение
Какую ночную вальгусную шину при подошвенном фасците лучше выбрать Ночные шины-это типы брекетов, которые используются для лечения таких заболеваний, как...
Форадил Комби (Foradil Combi) — инструкция по применению, состав, аналоги препарата, дозировки, побо
Инструкция по применению капсул для ингаляций Форадил Комби - состав, побочные эффекты, аналоги и цена Медикамент с бронхолитическим действием Форадил...
Adblock detector